蓝白菌斑的原理是什么?(蓝白菌斑的原理是什么)

蓝白菌斑的原理是什么？

蓝白斑筛选的原理 分类:生物科学蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法： 是根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。

现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。

在这个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS），它并不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞。

因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性，但它们同时存在时，可形成具有酶学活性的蛋白质。

这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补，称为α-互补。

由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落，因而易于识别。

然而，当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段，使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。

这种重组子的筛选，又称为蓝白斑筛选。

如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的钙化菌平板37℃温箱倒置培养12-16hr后，有重组质粒的细菌形成白色菌落。

为什么标记基因在转基因受体里面根本不会表达呢，谢谢？

第一，谁告诉你标记基因不表达的？瞎扯淡。标记基因有的表达，有的不表达。

第二，即便是不表达的标记基因，你就不能反过来想？比如最典型的例子，蓝白斑筛选：一段目的基因插入pMD-19T质粒，位点是半乳糖苷酶基因内部，标记基因也就是半乳糖苷酶基因，成功转基因的就应该不会表达半乳糖苷酶，因为标记基因在中间被打断了，然后质粒转入大肠杆菌DH5α，IPTG诱导下就无法产生半乳糖苷酶。但是反过来，没有导入目的基因的质粒就能在IPTG诱导下表达标记基因产生半乳糖苷酶，从而分解X-gal显示蓝色。没有转基因成功的因为表达了标记基因就显示出来了，去掉后剩下的不就是转基因成功的么。

蓝白班筛选的是什么？

蓝白斑筛选是一种基因工程常用的细菌重组子的筛选方法。

分子生物学拉链结构名词解释？

real-time PCR：通过对反应体系中荧光信号的测量实现对PCR过程中产物的量进行实时监测，并依照参照系统较为精确的计算出PCR初始模板量的一种新PCR技术。
ZIP：蛋白质C端的氨基酸序列中，每隔6个氨基酸是一个亮氨酸残基，形成α螺旋后，肽链每转两周就出现一个亮氨酸残基，且排列在螺旋的同一侧，当2个蛋白质分子平行排列时，亮氨酸之间相互作用就形成二聚体，形成“拉链”。
蓝白斑筛选：又名α互补筛选，当外源基因插入位点设计在lacZ基因内，会干扰lacZ的表达，利用lac阴性菌株为转染细胞，在含有X-gal和IPTG的培养基生长，若长出白色菌落说明有外源性基因插入，若长出蓝色菌落说明无外源基因插入。
操纵子：指启动基因、操纵基因和一系列紧密连锁的结构基因的总称，是原核生物的转录功能单位。